por Allcrom
Medição Pré-Clínica de Curvas Farmacocinéticas de Medicamentos
Anticancerígenos Usando VAMS®
Um artigo de Sebastian P.A. Rosser e outros pesquisadores, de quatro instituições na Austrália e publicado na edição de maio de 2022 do Therapeutic Drug Monitoring, investigou o uso de Dispositivos Mitra® com Tecnologia VAMS ® para o efeito do Tariquidar em combinação com Vincristina para melhorar a disponibilidade de drogas anticâncer. O artigo é intitulado “Quantificação de Vincristina e Tariquidar por cromatografia líquida-espectrometria de massa em Tandem em sangue total de camundongos usando microamostragem volumétrica absorvente para aplicações farmacocinéticas.”
O estudo validou totalmente um LC-MS/MS para medir simultaneamente ambas as drogas e isso foi aplicado a um estudo “PK” (farmacocinético) em 21 camundongos. O estudo mostrou que a exposição ao fármaco Vincristina aumentou quando o Tariquidar foi adicionado em combinação.
De Terapias para o Diabetes a Medicamentos Anticâncer
No início do século XX, a gigante farmacêutica Eli Lilly comercializou Insulina para o tratamento eficaz do diabetes mellitus. Embora alguns pacientes tenham respondido bem ao tratamento, outros desenvolveram resistência aos medicamentos. A busca por novas terapias começou e os pesquisadores olharam para os efeitos biológicos dos Extratos de Alcaloides de plantas como novos alvos de drogas.
Uma dessas plantas que ficou sob os holofotes foi a Periwinkle de Madagascar. Embora os extratos dessas plantas não tenham sido eficazes na redução da hiperglicemia, eles mostraram, no entanto, reduzir a proliferação de glóbulos brancos. Na década de 1960, dois medicamentos desenvolvidos a partir de Extratos de Pervinca (Vincristina e Vinblastina), foram aprovados pela Food and Drug Administration (FDA) dos EUA para o tratamento de vários tipos de câncer.
Resistência a Drogas Anticâncer
O câncer pode ser classificado como uma proliferação descontrolada de células específicas. Por exemplo, em certos tipos de câncer no sangue, os glóbulos brancos cancerígenos se multiplicam incontrolavelmente. Drogas como a Vincristina ajudam a interromper a proliferação celular ligando-se a uma proteína chamada Tubulina, impedindo a separação cromossômica durante a metáfase de uma célula.
Embora essas drogas sejam quimioterápicas altamente eficazes para muitas pessoas, elas também causam pressão seletiva no câncer e, como resultado, as células resistentes a drogas se tornam dominantes. Por muitos anos, os cientistas vêm estudando mecanismos de resistência a medicamentos e resistência a múltiplos medicamentos (MDR), como se tornou conhecido.
Um desses mecanismos é a utilidade da célula de uma classe de Proteínas chamadas transportadores ABC (ATP-Binding Cassette Transporters) que têm uma gama de utilidades. Estes incluem o transporte de classes específicas de moléculas dentro e fora de uma célula. Uma dessas Proteínas é chamada de Glicoproteína P (P-gp), que tem uma ampla especificidade para drogas e atua para exportar ativamente drogas como a Vancomicina para fora das células, impedindo o acúmulo de drogas celulares como um meio de desintoxicar a célula.
Uso de drogas para inibir a Glicoproteína P
A inibição da Glicoproteína P resulta em melhor eficácia da medicação anticâncer. Os cientistas têm desenvolvido drogas que atuam para inibir a bomba de P-gp, prevenindo o efluxo de drogas e, assim, melhorando a eficácia quimioterapêutica. Um desses agentes é o Tariquidar, um inibidor da bomba de P-gp de terceira geração.
Rosser e outros pesquisadores comentaram que o uso de inibidores da P-gp poderia afetar os perfis farmacocinéticos (PK) de fármacos como a Vincristina e, assim, influenciar a exposição ao fármaco. Por esse motivo, o grupo de pesquisa desenvolveu um método LC-MS/MS para medir simultaneamente ambas as drogas (Vancomicina e Tariquidar) a partir de extratos de pontas VAMS® e realizar medições pré-clínicas de PK em camundongos. O grupo escolheu Dispositivos Mitra® devido à natureza volumétrica dessa abordagem de amostragem, o que evita efeitos específicos do hematócrito observados com o cartão DBS.
Além disso, o elemento de microamostragem do Dispositivo está alinhado com a iniciativa “3Rs” que visa reduzir, refinar e substituir o uso de animais, sempre que possível, na comunidade de pesquisa para desenvolvimento de medicamentos. A Tecnologia VAMS® vai de encontro com o componente de “redução” dos 3Rs, considerando que mais amostras podem ser retiradas de um menor número de animais, enquanto ainda obtêm-se amostras de alta qualidade e resultados confiáveis. No artigo revisado aqui, o grupo de pesquisa observou que o Dispositivo Mitra® é significativamente menos invasivo do que a punção venosa, por isso também cumpriu o componente de refinamento dos 3Rs.
Métodos e Descobertas do Estudo de TDM
- A extração empregou uma abordagem de “deixar a ponta para trás”, onde as pontas VAMS® foram cortadas dos corpos do microamostrador Mitra® e depois extraídas em uma mistura de Acetonitrila e Água com Padrão Interno usando vórtice e ultrassom.
- O método foi validado de acordo com as diretrizes de validação do método bioanalítico da Agência Europeia de Medicamentos (EMEA). Abaixo estão alguns pontos a serem observados:
- Precisão muito alta (≥0,9987) e precisão (~90-95%) foram observadas para ambas as drogas entre plasma humano e extratos VAMS® de sangue total, permitindo que plasma humano seja usado para padrões e controles de qualidade (CQs), negando a necessidade de usar sangue seco de camundongo.
- Estabilidade do Analito:
- A Vincristina permaneceu estável (<±15%) para todos os parâmetros medidos, incluindo 24° C e – 40° C durante um período de 30 dias.
- O Tariquidar manteve a estabilidade por até 14 dias em temperatura ambiente e foi estável aos 30 dias a -40°C.
- As recuperações de extração foram todas acima de 93% para ambos os medicamentos e todos os três níveis de CQ.
- A imprecisão para o Baixo CQ da Vincristina foi de 18,7%, o que estava apenas dentro das diretrizes. Além disso, a imprecisão para o CQ intermediário para o Tariquidar foi de 15,7%, o que estava fora das diretrizes de ±15%; o grupo concluiu que isso pode ter sido resultado da estabilidade dessa molécula.
- Resultados farmacocinéticos:
- Os camundongos (n=21) receberam ambos os medicamentos (grupo C) ou apenas Vincristina (grupo A) ou apenas Tariquidar (grupo B). Um grupo de controle (D) acabou de receber Glicose (veículo de medicamento). A coleta de sangue foi realizada por lancetagem da veia safena ao longo de 7 pontos de tempo usando 2 grupos de camundongos.
- A depuração da Vincristina foi reduzida pela metade quando em combinação com o Tariquidar; o grupo de pesquisa sugeriu que isso indicava que a exposição ao fármaco Vincristina aumentava devido à inibição da P-P-gp.
- Precisão muito alta (≥0,9987) e precisão (~90-95%) foram observadas para ambas as drogas entre plasma humano e extratos VAMS® de sangue total, permitindo que plasma humano seja usado para padrões e controles de qualidade (CQs), negando a necessidade de usar sangue seco de camundongo.
- Eles concluíram que efeitos semelhantes também podem ser vistos com substratos de P-gp além de apenas Vincristina.
- O grupo também comentou que não esperaria que a farmacocinética do Tariquidar mudasse como resultado de outros medicamentos concomitantes.
- Evidências preliminares de outros estudos de Tariquidar sugerem que a administração não afeta a tolerabilidade do sujeito.
Observações Neoteryx
Este estudo demonstra a utilidade da microamostragem de sangue seco capilar para obter dados farmacocinéticos de alta qualidade de um modelo pré-clínico. A microamostragem não apenas ajuda significativamente na redução e no refinamento dos 3Rs da pesquisa com animais para melhorar o bem-estar animal, mas também aumenta o número de pontos de tempo por camundongo e permite maior qualidade de dados sem depender da combinação de dados de muitos sujeitos.
Para saber mais sobre o Dispositivo Mitra® e sua aplicabilidade entre em contato com [email protected]