Amostras VAMS® de Urina Seca para medir níveis Antimaláricos
por Neoteryx
Um artigo publicado por Nicolas Taudon, com outros pesquisadores, no Armed Forces Biomedical Research Institute (França) na edição de Dezembro de 2020 do Journal of Analytical Methods in Chemistry, relatou um método para medir um Medicamento Antimalárico a partir de amostras VAMS® de Urina Seca coletadas em Dispositivos Mitra® baseados na tecnologia VAMS®. O artigo é intitulado “Um Método Validado de Espectrometria de Massa por Microamostragem-Líquida Volumétrica Absorvente Validada para Quantificar os Níveis de Doxiciclina na Urina: Uma Aplicação para Monitorar a Conformidade com a Quimioprofilaxia da Malária.”
O artigo descreve o desenvolvimento e a validação de um ensaio para o Medicamento Antimalárico a partir de amostras de Urina Líquida e amostras de Urina Seca, incluindo um teste piloto de campo em 29 voluntários. Devido à sensibilidade do ensaio VAMS®, descobriu-se que o método monitora retroativamente de forma confiável, medindo os níveis de drogas por até 4 dias antes da última dose tomada. O grupo desenvolveu um método em dispositivos Mitra® com Tecnologia VAMS®, relatando que “os resultados alcançados no trabalho apresentado mostraram que a conformidade com a Doxiciclina para Quimiprofilaxia em campo pode ser facilmente monitorada usando um dispositivo de microamostragem de absorção volumétrica totalmente preciso”, como o Mitra®.
O Impacto Global da Malária
O documento começa relatando que, em 2017, houve 219 milhões de casos globais de malária que, lamentavelmente, resultaram em 435.000 mortes. Infelizmente, a maioria desses casos ocorreu na população pediátrica da África. O grupo de pesquisa relatou ainda que 25 a 30 milhões de pessoas viajam anualmente para a África em áreas endêmicas de malária, incluindo 10.000 soldados franceses, trabalhadores internacionais e turistas. Como resultado, cerca de 30.000 casos de malária são relatados a cada ano. A adesão à Medicação Antimalárica profilática é fundamental para reduzir o sofrimento do paciente.
Desafios com a conformidade da doxiciclina
O estudo de Taudon, com outros pesquisadores, discute como são dadas 100 mg de Doxiciclina oral para Quimioprofilaxia às forças armadas francesas, no entanto, descreve ainda o fato de que existe uma forte correlação entre os incidentes de malária e a falta de adesão à Quimioprofilaxia. A falta de consistência na administração do Antimalárico Doxiciclina é uma tendência que também foi relatada por outros exércitos. Existem várias razões para essa falta de conformidade, incluindo os desafios de trabalhar em zonas de combate, bem como a interrupção prematura da Quimioprofilaxia ao sair de regiões afetadas pela malária.
Monitoramento do Uso & Eficácia do Antimalárico Doxiciclina
Como a Doxiciclina é, em parte, eliminada pela urina (35-60%), a urina pode ser usada como uma matriz adequada para medir os níveis da droga e, portanto, a adesão. Além disso, a urina também pode ser usada para monitorar os níveis de drogas no sistema de um indivíduo vários dias após a administração. No entanto, os pesquisadores relatam que o custo do transporte de Urina Congelada é alto, então uma solução de matriz seca era desejável. O artigo destacou que o cartão DBS “não é passível de quantificação” devido à baixa reprodutibilidade da amostragem.
Objeto do Estudo da Doxiciclina
Desenvolver um ensaio simples de Urina Seca com VAMS® para monitorar a Quimioprofilaxia da Doxiciclina em pessoas em áreas afetadas pela malária para garantir que as amostras permaneçam estáveis durante o transporte a um laboratório sem a necessidade de congelamento.
Extração das Amostras – Métodos e Descobertas do Estudo
- As amostras foram extraídas das pontas VAMS® dos Dispositivos Mitra® (10µL) em uma mistura de H2O – Acetonitrila, Ácido Trifluoroacético e Padrão Interno usando vórtice e centrifugação. Este foi comparado aos resultados da diluição de 10µL de urina úmida em um diluente semelhante.
- Validação: Para seletividade, 6 fontes diferentes de urina foram comparadas para pesquisar por interferências.
A precisão inter e intra-corrida foi inferior a 14%, com precisão variando entre 96-106%.
A recuperação da extração foi obtida em Controle de Qualidade baixo, médio e alto para 6 réplicas e foi de 108,7% (DPR – Desvio Padrão Relativo médio = 5,4%). A recuperação média foi de 109% (DPR, 7,0%). Acredita-se que o leve viés nos resultados seja devido a uma leve perda de solvente.
A transição foi controlada e o efeito da Matrix foi medido em seis voluntários saudáveis, dos quais 6 lotes diferentes de Doxiciclina foram testados e aprovados.
O Limite de Quantificação (LQ) desejado foi de 250 ng/mL com 11% de precisão. O Limite de Detecção (LD) encontrado foi de 166 ng/mL.
Em termos de relação de resposta ao medicamento, os ensaios inter-dia foram preparados em dias diferentes (n=6). O Coeficiente de determinação foi maior que 0,996 para cada condição testada. Além disso, o %DPR na inclinação foi melhor para os dispositivos Mitra® (10,21%) em comparação com o experimento de diluição (15,1%).
Uma estabilidade de 1 mês de Doxiciclina foi observada a partir de dispositivos Mitra® em temperatura ambiente (selados no escuro em um envelope de amostra com dessecante) com valores de exatidão e precisão das duas concentrações estudadas como 91,0; 114,6% e 2,5; 13,1%. Após o período de um mês em temperatura ambiente, foram observadas perdas inaceitáveis.
Comparando dados de 29 amostras urinárias de voluntários tomando 1 dose do medicamento por dia, o valor do Coeficiente de Determinação (R2) ao comparar os métodos de amostragem úmida e seca foi de 0,9328 com ~6% de viés positivo visto com as amostras secas em comparação com as úmidas ou tradicionais.
Discussão e conclusões dos autores do estudo
- Dois métodos para medir a Doxiciclina foram desenvolvidos. Um é um método úmido e o outro “usando um dispositivo de microamostragem perfeitamente preciso [Mitra]”.
- Com base no Limite Inferior de Quantificação (LIQ) alcançado, bem como na meia-vida do plasma > 16h e na boa estabilidade observada da amostra seca, a equipe poderia usar o método para “monitorar novamente” a medicação que havia sido tomada até 4 dias antes à análise.
- Verificou-se que a estabilidade do Antimalárico nos dispositivos Mitra® (selados em envelopes de amostra com dessecante ao abrigo da luz) é de 31 dias à temperatura ambiente e 12 meses quando armazenado no congelador (-80 °C).
- “Os resultados obtidos em amostras coletadas de trabalhadores sob Quimioprofilaxia com Doxiciclina foram semelhantes aos dois métodos, mostrando que o dispositivo VAMS® [Mitra®] é uma alternativa de coleta relevante.”
- Eles comentaram que os Dispositivos Mitra® eram “fáceis de usar” e poderiam ser “empregados rotineiramente e estendidos a outras aplicações no campo”.
Um último ponto foi que era importante realizar experiências de estabilidade para qualquer desenvolvimento de novos fármacos ao considerar as condições durante o transporte.
Considerações Finais da Neoteryx
O mundo continua a concentrar-se no combate à pandemia da COVID-19 – na altura em que esta revisão bibliográfica foi escrita, no início de 2022, foram noticiados 307 milhões de casos e 5,49 milhões de mortes relacionadas com a COVID em todo o mundo. No entanto, as pressões da pandemia às vezes podem ofuscar outras crises globais de saúde, como a malária, que só em 2017 causou 219 milhões de casos em todo o mundo e 435.000 mortes. Ações simples, como melhorias na adesão à Quimioprofilaxia da malária, podem ajudar a mitigar alguns desses casos e o uso de amostras VAMS® de Urina Seca pode ser uma excelente ferramenta para monitorar aqueles que tomam esses medicamentos Antimaláricos preventivos.
Este estudo foi resumido para nossos leitores por James Rudge, PhD, Diretor Técnico da Neoteryx. Este é um conteúdo com curadoria. Para saber mais sobre a importante pesquisa descrita nesta revisão, visite o artigo original publicado no Journal of Analytical Methods in Chemistry.
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