Microamostragem para medir Drogas
Anticancerígenas e seus Metabólitos
por Neoteryx
Um artigo publicado por Mirjana Radovanovic e outras várias instituições na Austrália, na edição de janeiro de 2022 do Journal of Chromatography B, relatou o desenvolvimento e validação de um método HPLC-MS/MS de drogas anticancerígenas e metabólitos usando Dispositivos de Microamostragem Mitra® com Tecnologia VAMS®. O artigo é intitulado “Medição de 5-fluorouracil, capecitabina e suas concentrações de metabólitos no sangue usando tecnologia de microamostragem volumétrica absorvente e HPLC-MS/MS”. Descreve o desenvolvimento de 5-fluorouracil, capecitabina e suas concentrações de metabólitos comparando sangue capilar e venoso coletados de 20 pacientes em um estudo. Os pesquisadores puderam concluir que a coleta de sangue usando microamostragem volumétrica absorvente provou ser tão confiável quanto a coleta de sangue convencional para 5-FU e capecitabina.
No entanto, é importante saber que a meia-vida do fármaco 5-FU em sangue úmido torna a amostragem úmida um desafio, o que levou a um estudo comparativo desafiador. O grupo de pesquisa propôs um trabalho adicional para continuar a explorar a possibilidade futura de que amostras capilares de sangue seco substituam as coletas venosas tradicionais para esses analitos.
Contexto sobre 5-FU e outros medicamentos quimioterápicos
O 5-Fluorouracil (5-FU) é um medicamento quimioterápico que há 60 anos é usado sozinho ou em combinação com outros medicamentos para tratar uma variedade de cânceres, como os encontrados no trato gástrico, pâncreas, cabeça e pescoço. O fluorouracil é um antimetabólito e antineoplásico, que bloqueia uma enzima envolvida na conversão de citosina no nucleotídeo citosina monofosfato. Este é um passo importante na integração do nucleotídeo no DNA e interrompe a síntese do DNA.
A dosagem de 5-FU atualmente é baseada na área de superfície corporal, no entanto, relatos em outros estudos mostram alta variabilidade entre pacientes. Em seu estudo, Mirjana Radovanovic e outros, comenta que a individualização da dose seria uma abordagem lógica para reduzir a toxicidade e melhorar os resultados do câncer. De fato, a Associação Internacional de Monitoramento de Medicamentos Terapêuticos e Toxicologia Clínica (IATDMCT) recomenda o monitoramento terapêutico de IV 5-FU para câncer colorretal, de cabeça e pescoço. Atualmente, isso é obtido pela amostragem de sangue cerca de 18 horas após o início do tratamento.
Capecitabina, um pró-fármaco de 5-FU administrada por via oral, foi desenvolvida para imitar a infusão contínua de 5-FU. A capecitabina pode ser autoadministrada, mas não é rotineiramente monitorada por meio de programas de monitoramento de drogas terapêuticas (MDT). O grupo de pesquisa observou que, talvez por isso, graves eventos adversos associados à capecitabina são observados com menos frequência na literatura. No entanto, Mirjana Radovanovic comentaram que estudos de monitoramento da capecitabina seriam de interesse para investigar o significado da droga e seus metabólitos durante a administração a longo prazo.
Tanto o 5-FU quanto a capecitabina são facilmente metabolizados, portanto, é fundamental a utilização da cadeia fria no transporte e armazenamento de amostras úmidas de sangue e seus derivados para obter medições confiáveis. No entanto, a utilização de cadeia fria no transporte e armazenamento de amostras de sangue venoso úmido pode ser impraticável em regiões de poucos recursos ou em algumas instalações. Outra desvantagem da amostragem venosa, conforme destacado no estudo revisado aqui, é quando são necessárias medições em farmacocinética. A amostragem com foco em análises farmacocinéticas para obter dosagens individuais, por exemplo, requer mais de uma coleta de sangue. Esta é uma preocupação em populações criticamente doentes ou pediátricas, tanto do ponto de vista intervencionista quanto do volume de sangue.
Os pesquisadores comentaram que ambos os problemas poderiam ser resolvidos empregando-se a microamostragem remota, onde as amostras poderiam ser coletadas em casa pelo paciente ou voluntário do estudo. A microamostragem remota usando Dispositivos Mitra® produz microamostras de sangue seco para análise laboratorial. Um benefício adicional das microamostras de sangue seco é que esses medicamentos anticancerígenos são estáveis no sangue seco, de modo que o transporte em cadeia fria pode ser eliminado.
A microamostragem remota também tem benefícios orçamentários. O grupo de pesquisa relatou que o custo geral envolvido na coleta, processamento, armazenamento e transporte foi significativamente reduzido com métodos de microamostragem. Além disso, as microamostras são benéficas às populações pediátricas, pois coletas de alto volume de sangue podem afetar negativamente a saúde de bebês e crianças. Finalmente, foi destacado que a Tecnologia de Microamostragem Volumétrica Absorvente ou VAMS® foi preferível ao DBS, pois supera as preocupações de homogeneidade da amostra com protocolos pós-punção e viés de hematócrito da área local. Por essas razões, o grupo iniciou o desenvolvimento de um ensaio HPLC-MS/MS para 5-FU, capecitabina e metabólitos.
Métodos Estudados no Monitoramento Terapêutico de Drogas (MTD) anticâncer
Calibradores e Controles de Qualidade foram adicionados ao sangue no dia da análise, amostrados em dispositivos Mitra® e armazenados por pelo menos 3h.
Um método de extração orgânica foi realizado em Acetonitrila: água com Padrão Interno usando sonicação e vórtex, secagem e posterior reconstituição em ácido fórmico a 0,1% antes da análise.
A validação foi realizada de acordo com as diretrizes da Agência de Controle de Alimentos e Medicamentos – FDA (Food and Drug Administration) e Associação Nacional de Autoridades de Teste – NATA (National Association of Testing Authorities). Foram conduzidos testes especificamente em linearidade, exatidão e precisão, especificidade e seletividade (incluindo efeito associado à matriz, recuperação e avaliação da eficiência do processo), transferência e estabilidade (-30° C, Temperatura Ambiente, 3 dias, 9 meses, 2 anos).
Amostras de sangue capilar e venoso foram coletadas de pacientes voluntariados com câncer. Ambos foram amostrados em Dispositivos Mitra® para o estudo comparativo.
Resultados e Discussão dos Autores do Estudo
O método HPLC-MS/MS foi desenvolvido com sucesso.
Resultados variados foram observados para o efeito de matriz, recuperação e eficiência do processo nas amostras de sangue seco. De fato, uma recuperação abaixo do ideal foi observada em um lote do Dispositivo Mitra®. Curiosamente, otimizar o tempo de extração não melhorou os resultados.
A estabilidade foi excelente em 9 meses em temperatura ambiente e 2 anos a –30°C e 3 dias a 50°C.
Ao medir o 5-FU administrados por via intravenosa em pacientes, uma grande variabilidade foi observada entre amostras capilares pareadas e amostras venosas coletadas com o Dispositivo Mitra®. Isso foi, em parte, atribuído à meia-vida curta do 5-FU (15min) e às diferenças nos tempos de amostragem. A qualidade da coleta da amostra pelo usuário final, como volume de amostra insuficiente, também podem ter contribuído.
Para o estudo oral, onde os pacientes receberam capecitabina, os autores afirmaram: “[A] boa relação foi observada entre as amostras Mitra® VAMS® preparadas a partir de sangue capilar e aquelas preparadas a partir de sangue venoso para todos os metabólitos com relação ligeiramente mais fraca para 5′ d-FCR (y = 0,6282*X + 194).” No entanto, o pequeno tamanho da amostra (n-20) contribuiu, em parte, para ampliar intervalos de confiança superiores e inferiores de um gráfico de viés Bland-Altman.
Outros estudos estão em andamento para explorar a viabilidade do uso de microamostragem para capecitabina e 5-FU TDM. Em estudos futuros, o grupo deseja comparar os níveis plasmáticos e capilares.
Conclusões dos autores do estudo
Um método HPLC-MS/MS foi desenvolvido para amostras extraídas das pontas VAMS® para medir capecitabina, 5FU e metabólitos relacionados.
Estudos mais extensos precisam ser realizados para construir uma relação entre plasma e sangue seco.
A estabilidade observada em amostras de sangue venoso coletadas em Dispositivos Mitra® destacam o potencial de seu uso no transporte de amostras de sangue em temperatura ambiente versus métodos atuais, que exigem manter as amostras de sangue refrigeradas.
Considerações Finais da Neoteryx
Ao desenvolver ensaios em sangue seco, a estabilidade do analito é absolutamente fundamental para boas validações. Uma observação interessante deste estudo é que quando os analitos foram secos em dispositivos Mitra® com Tecnologia VAMS®, eles se mostraram muito estáveis. No entanto, quando em sangue úmido, a instabilidade do analito tornou a comparação da amostragem capilar e venosa um desafio.
Os autores do estudo propuseram que a principal causa disso foi a diferença nos tempos de coleta entre sangue venoso e capilar das amostras pareadas, o que impactou os níveis relatados de 5-FU como resultado de sua meia-vida curta. Isso ilustra novamente o quão crítico é conduzir o comparativo entre sangue capilar e sangue venoso e desenvolver qualquer estudo potencial utilizando dispositivos de forma simultânea, especialmente quando a estabilidade do analito na matriz úmida é um problema.
Outro ponto a ser levantado foi a inconsistência das recuperações absolutas dos dispositivos de microamostragem. Conforme relatado em um estudo anterior, os cientistas da Merck demonstraram que passar de um método de extração orgânico para um método de extração aquoso seguido de extração líquido-líquido melhorou muito a eficiência da extração. Uma abordagem semelhante pode ajudar a melhorar a precisão do 5-FU e seus componentes relacionados. Desejamos ao grupo tudo de bom com o trabalho criterioso que estão realizando na pesquisa de monitoramento terapêutico de câncer.
Este estudo foi resumido para nossos leitores por James Rudge, PhD, Diretor Técnico da Neoteryx. Este é um conteúdo com curadoria. Para saber mais sobre a importante pesquisa descrita nesta revisão, visite o artigo original publicado no Journal of Chromatography B.
Para desenvolver uma maior compreensão do que é possível com os ensaios de sangue seco e como desenvolver métodos para isso, consulte o suporte Mitra® da Allcrom – [email protected] – para maiores informações.