Estabilidade de Medicamentos Baseados em Anticorpos Monoclonais em VAMS®
por Allcrom
Um artigo de Hua, com outros pesquisadores, na Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. nos Estados Unidos, publicado na edição de Abril de 2021 da Bioanalysis, investigou a estabilidade de dois Anticorpos Monoclonais (mAbs) sob várias condições usando Dispositivos de Microamostragem Mitra® com Tecnologia VAMS®.
O artigo é intitulado “Avaliação da estabilidade de Anticorpos Monoclonais terapêuticos em sangue total usando Microamostragem Volumétrica Absorvente.” Este estudo de mAbs mostrou excelente estabilidade de Trastuzumabe e Daclizumabe, mesmo quando as amostra Mitra® foram armazenados em temperatura ambiente.
O Uso Indevido de Drogas é um Problema Global que Afeta os Laboratórios de Toxicologia
Desde a década de 1980, houve mais de 100 Anticorpos Monoclonais aprovados para utilização numa variedade de áreas de tratamento. O estudo de terapias de Anticorpos Monoclonais descrito no artigo de Hua Li e outros pesquisadores, concentra-se na aplicação de dois fármacos mAbs.
O primeiro medicamento é o Trastuzumabe, que foi desenvolvido para tratar o câncer de mama HER2 positivo. Este tipo é responsável por 20 a 30% dos cânceres de mama e tem o segundo pior prognóstico para a doença. O HER2 é um receptor do fator de crescimento epidérmico e atua como uma Tirosina Quinase que desempenha uma função fundamental no crescimento das células. Muitas vezes é regulado positivamente em cânceres como o carcinoma de mama. Acredita-se que o Trastuzumabe tenha três mecanismos de ação: internalização de HER2, citotoxicidade dependente de anticorpos e inibição de vias específicas que aumentam a parada do ciclo celular e suprime o crescimento e a proliferação celular.
O segundo fármaco mAbs discutido no artigo é o Daclizumabe, que é usado para tratar a Esclerose Múltipla Recidivante. Curiosamente, o Daclizumabe foi originalmente desenvolvido para prevenir a Rejeição de Órgãos Transplantados e para tratar Uveíte Grave e Leucemia de Células T.
O método de ação desta droga é bloquear uma parte crítica do receptor de Interleucina-2 de alta afinidade (IL-2R). Isso, por sua vez, inibe a ativação de Células T, bem como a sobrevivência e expansão de Células T reguladoras, incluindo a apoptose de Células T induzida por ativação (morte celular programada).
Uso de Dispositivos Mitra® para Proteínas Grandes
O grupo de pesquisa da Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals havia publicado anteriormente sobre ambos os medicamentos mAbs (Trastuzumabe e Daclizumabe) depois Hua, junto com outros pesquisadores, investigaram com sucesso estes em um estudo farmacocinético pré-clínico. Eles também optaram por usar Dispositivos Mitra® com Tecnologia VAMS® para o estudo anterior devido à sua natureza volumétrica.
No artigo atual, os autores afirmaram: “Os microamostradores Mitra® se destacam por seus méritos exclusivos, como requisitos de pequeno volume, precisão, facilidade de uso e eliminação de custos relacionados a riscos biológicos e de transporte em cadeia fria”. Eles também disseram que VAMS® é uma tecnologia menos invasiva em comparação com a amostragem úmida padrão, sendo preferida por pacientes vulneráveis, como crianças e idosos.
Uma observação que o grupo fez foi que, embora houvesse muitos estudos de microamostragem em Dispositivos Mitra® investigando moléculas pequenas, havia poucos focados em moléculas grandes. Por esse motivo, o grupo decidiu realizar um estudo de acompanhamento para investigar a estabilidade dos mAbs em Dispositivos Mitra® e também em extratos das microamostras.
Métodos e Descobertas do Estudo de TDM
- O grupo usou sangue de camundongo estabilizado com EDTA fresco para aumentar o Trastuzumabe e o Daclizumabe. Eles usaram um ensaio de imunoabsorção enzimática previamente validado (ELISA) para medir os mAbs das amostras de sangue.
- Dispositivos Mitra® (20 µL) foram usados para amostrar o sangue em tubos e, após a secagem, foram extraídas em solução salina tamponada com Fosfato antes da análise.
- O grupo realizou cinco experimentos:
- Recuperação de mAbs de Dispositivos Mitra® secos em amostragem realizada com 100 ou 1000 ng/mL de qualquer medicamento, secagem do dispositivo em temperatura ambiente, no escuro por até 480 horas para Daclizumabe e 216 horas para Trastuzumabe. Todas as amostras para Daclizumabe foram estáveis por cerca de 300 horas e 96 horas para Trastuzumabe.
- Recuperação de mAbs de Dispositivos Mitra® armazenados a -80°C onde os dispositivos foram preparados da mesma maneira que para o experimento 1; eles foram secos em temperatura ambiente durante a noite no escuro, mas depois armazenados no congelador. Os dispositivos amostrados foram então testados a cada duas semanas. Durante este experimento, o Daclizumabe ficou estável (dentro de ±20% de desvio) por até 84 dias e o Trastuzumabe mostrou uma duração de estabilidade semelhante em até 91 dias.
- Estabilidade das extrações dos dispositivos Mitra® armazenadas a -80 °C. Os Dispositivos Mitra® foram preparados como para o experimento 1, mas dessa vez, em vez dos dispositivos, os extratos foram armazenados a -80°C. Os resultados mostraram que os extratos estavam dentro de ±20% de desvio para as mesmas durações do experimento 2.
- Avaliação da recuperação de Daclizumabe armazenado em temperatura ambiente no escuro versus luz e medições em 96, 240, 336 e 480 horas. Nenhuma diferença foi observada entre essas condições. Devido a problemas encontrados durante a pandemia de COVID-19, o mesmo experimento não foi conduzido com Trastuzumabe.
- Avaliação da taxa de recuperação de extração de Daclizumabe armazenado por 480 horas em condições de luz e escuridão em temperatura ambiente em diferentes extrações. O grupo de pesquisa não viu diferença na extração em temperatura ambiente contra 37 °C. Quando seco em condições de luz, o tempo de extração fez a diferença onde um viés negativo foi visto em 4 horas em comparação com 1-3 horas. O tempo de extração não afetou os dispositivos amostrados que foram armazenados no escuro.
Conclusões dos autores do estudo
- Os Dispositivos Mitra® com Tecnologia VAMS® podem ser usados para grandes amostragens terapêuticas remotas em temperatura ambiente sem refrigeração ou congelamento, o que economizaria dinheiro e tempo. Além disso, a amostragem com esses dispositivos pode ser conduzida por pessoas leigas e em casa.
- As amostras VAMS®, congeladas a -80 °C, podem ser armazenadas por um longo tempo.
- Para o Daclizumabe, as microamostras não precisaram ser protegidas da luz. Trastuzumabe Nb (Nanobodies) não foi testado neste experimento.
- Para o Daclizumabe, os tempos de extração não devem ser superiores a 3 horas.
Comentários Neoteryx
Esta investigação completa sobre a estabilidade da extração demonstrou como Anticorpos Monoclonais ou mAbs são estáveis em microamostras de sangue seco coletadas em dispositivos de microamostragem, como o Mitra ®.
É sempre fundamental realizar experimentos de estabilidade que imitem a jornada da amostra ao validar métodos, mas certamente este e outros estudos mostram que os anticorpos (que foram testados) possuem estabilidade suficiente para aplicações de amostragem remota.
Sobre as Soluções em Microamostragem Fornecidas pela Allcrom
A Allcrom está se especializando em dispositivos de microamostragem inovadores, minimante invasivos e que possibilitam uma amostragem remota, permitindo modelos descentralizados de pesquisa e assistência médica.
Os Dispositivos Mitra® são o primeiro dessa gama e em breve teremos mais novidades.