Entrevista: Microamostragem em Toxicologia, Biomarcadores de Drogas e Álcool

Neoteryx: Você usa microamostragem há algum tempo, mesmo antes de começar a usar o Dispositivo Mitra^® para aplicar microamostragem volumétrica absorvente. Como e por que você se interessou pela microamostragem para seus estudos de pesquisa?

Dr. Stove: Isso foi mais ou menos em 2010, quando eu ainda era um pós-doutorando. Naquela época, eu supervisionava uma aluna de doutorado. Ela trabalhou em um composto chamado GHB, ou Ácido Gama-Hidroxibutírico, que é de interesse em Toxicologia Forense porque esse é o campo em que estamos trabalhando.

Em algum momento, começamos a trabalhar em pequenas amostras de sangue — 50 µL de amostras de sangue. Em um determinado momento, pensamos: “Ok, se podemos trabalhar em amostras de sangue líquido de 50 µL, podemos também trabalhar em amostras de sangue seco de 50 µL?!” E, depois disso, tentamos a aplicação de sangue em papel de filtro. Desde então, trabalhamos com microamostragem. Não foi algo realmente planejado, meio que nos deparamos com isso por acidente.

Neoteryx: Você e o Dra. Van Uytfanghe recentemente colaboraram em alguns artigos publicados descrevendo seu trabalho em PEth, como um marcador direto da ingestão de álcool. Dr. Van Uytfanghe, você pode me dizer por que o PEth é um bom biomarcador para determinar a ingestão de álcool e como a coleta remota de amostras com Dispositivos Mitra® e microamostragem o ajuda a rastreá-lo?

Dra. Van Uytfanghe: Sim. Em primeiro lugar, PEth é a abreviatura para o Biomarcador de Álcool Fosfatidiletanol. E, no espectro bruto de Biomarcadores de Álcool, o PEth é excelente por duas razões:

Primeiro, ele é formado apenas quando o Etanol está presente no sangue de alguém — então, quando não há Etanol, não haverá PEth.

Em segundo lugar, ainda não há relatos de resultados falso-positivos ou falso-negativos ao monitorar PEth. Portanto, promovemos o uso da coleta remota de amostras entre os clínicos, entre os patologistas clínicos e profissionais de saúde com quem colaboramos. Isso ocorre devido à facilidade de uso, ao fato de que a coleta de amostras pode ser feita no local e porque a secagem do sangue imediatamente após a coleta da amostra protege a amostra de instabilidades.

Além disso, as amostras também podem ser facilmente enviadas por correio normal. Portanto, há várias vantagens em usar o dispositivo remoto.

Neoteryx: Dr. Stove, seus estudos recentes de PEth têm sido um esforço colaborativo com a equipe de pesquisa de laboratório do Instituto Nacional de Criminalística e Criminologia (NICC). Você pode explicar o que seus dois laboratórios estão tentando alcançar juntos, da perspectiva do laboratório em termos de metodologia e de uma perspectiva de criminologia em termos de como seu trabalho pode ser aplicado no mundo?

Dr. Stove: Ambos os nossos laboratórios estão trabalhando no campo da Toxicologia Forense e, historicamente, tivemos várias colaborações entre nossos laboratórios. No contexto do PEth, já colaboramos para trabalhar na validade do PEth como marcador de Álcool usando gotas de sangue seco convencional.

No âmbito desse trabalho exploratório, já fizemos uma comparação da utilidade do PEth e comparamos com Biomarcadores de Álcool mais estabelecidos, como Etil Glicuronídeo e CDT (transferrina deficiente em Carboidratos). A CDT é, na Bélgica e também em todo o mundo, ainda um dos biomarcadores indiretos mais utilizados, mas tem algumas desvantagens. Se for positivo — se a CTD for bastante alta — está refletindo, em muitos casos, o consumo crônico e excessivo de Álcool.

No entanto, uma desvantagem é que, se não for elevado, não diz nada e definitivamente não pode ser usado para demonstrar abstinência. Por causa disso, ambas as missões dos nossos laboratórios são, na verdade, as mesmas. Nosso objetivo é fornecer serviços de alta qualidade às partes interessadas. Em muitos casos, este poderia ser o Departamento de Justiça.

Além disso, combinando isso com o que eu poderia descrever como educação sobre esses Biomarcadores. O que significa que também tentamos garantir que aqueles que precisam tomar os aspectos judiciais — por exemplo, dirigir e beber — também estejam cientes das possibilidades de Biomarcadores de Álcool.

E, além disso, colaborar para que esse método de rotina fosse validado realmente demonstrou a comparabilidade e a transferibilidade dos métodos. Isso traz muito valor para a confiabilidade dos métodos que estão sendo executados em nossos laboratórios, tanto aqui na Universidade de Ghent quanto no NICC.

Neoteryx: Dra. Van Uytfanghe, quão “portátil” ou transferível é o seu método de microamostragem para estudos de PEth e quão fácil será para outros laboratórios replicarem em todo o mundo?

Dra. Van Uytfanghe: Para laboratórios que possuem habilidades básicas na execução de métodos quantitativos de espectrometria de massa, o método deve ser fácil de implementar e copiar. Em essência, combinamos uma extração aquosa simples dos dispositivos Mitra combinados com uma extração líquido-líquido do PEth da fase aquosa.

Em seguida, o PEth do extrato é medido usando espectrometria de massa. Então nós rodamos aqui no nosso laboratório, com limpeza manual de amostras, até 120 amostras por dia. Mas o método também pode ser transferido usando robotização e, em seguida, em um laboratório de alto rendimento, também deve ser útil. No manuscrito que descreve os métodos, procuramos ser o mais completos possível. Portanto, também descrevemos os problemas com os quais nos deparamos após a validação dos métodos e explicamos explicitamente a razão pela qual fazemos certas coisas de uma determinada maneira.

Isso deve poupar a outros pesquisadores de uma pilha de trabalho após a validação de seus próprios métodos. Além disso, como já mencionado pelo Professor Stove, realizamos uma extensa comparação de métodos com um de nossos pares. Isso já provou a transferibilidade dos métodos. Também expôs o calcanhar de Aquiles dos métodos — ou seja, padronização e calibração das medições. Isso é realmente um ponto de atenção.

Neoteryx: Seu trabalho na detecção do uso de Álcool e substâncias, ou uso excessivo, é tão importante à luz das estatísticas que nos dizem que aproximadamente três milhões de pessoas em todo o mundo morrem todos os anos como resultado do abuso de Álcool. Isso é aproximadamente uma em cada 20 mortes relacionadas ao álcool em todo o mundo. Sua equipe de pesquisa também estuda outra substância de abuso que leva a quase 600.000 mortes por ano em todo o mundo e são os Opioides. Você pode nos contar sobre seus estudos com Opioides?

Dr. Stove: Sim, também estamos trabalhando com Opioides. Como já mencionado, temos duas linhas de pesquisa principais em nosso laboratório. Um envolvendo bioanálise, que inclui microamostragem, e o outro aplicando bioensaios. Esses estudos de Opioides estão vinculados à linha de pesquisa de bioensaio do laboratório. Nestes ensaios, usamos Células Vivas para procurar a atividade de um determinado grupo de compostos.

Fizemos isso, por exemplo, para os Canabinoides e também para os Opioides. O ensaio, que emprega Células Vivas e é baseado em luminescência, pode realmente ser usado no laboratório como uma ferramenta de triagem para descobrir quais amostras biológicas contêm Opioides. Isso pode ser independentemente da identidade do Opioide. Em certo sentido, resume-se ao fato de que podemos identificar qualquer Opioide conhecido ou desconhecido, existente ou futuro em uma amostra biológica.

Esses bioensaios podem ser usados para fins de triagem, como eu disse, mas agora também os usamos rotineiramente para avaliar a atividade dos Opioides mais novos que estão no mercado ilícito ou que se espera que entrem no mercado de drogas ilícitas. E, assim, também podemos ajudar os reguladores a antecipar quais compostos podem estar lá em breve.