Microamostragem para medir Tamoxifeno para TDM de câncer de mama

Índices e Tratamentos de Câncer de Mama

De acordo com a Organização Mundial da Saúde (OMS), o câncer de mama foi relatado como o câncer mais prevalente em 2020. De fato, o relatório mencionou que, somente em 2020, havia 2,3 milhões de mulheres recém-diagnosticadas com câncer de mama e 7,8 milhões vivendo com a doença em todo o mundo. Infelizmente, também houve 685.000 mortes como resultado da doença. Para outros tipos de câncer, assim como no câncer de mama, existem várias opções de tratamento, incluindo quimioterapia, cirurgia, radioterapia, terapia direcionada, bisfosfonatos para fortalecimento ósseo em tipos de câncer que causam dano ósseo e terapia hormonal. Um tratamento hormonal é o modulador seletivo do receptor de câncer de estrogênio Tamoxifeno (TAM).

História e Importância do Tamoxifeno

Sintetizado em 1962 pela ICI (agora parte da AstraZeneca), o composto ICI 46474 (agora Tamoxifeno) foi originalmente desenvolvido como um contraceptivo oral. No entanto, embora tenha sido projetado para ser um anti-estrogênio, o composto ICI agiu para estimular a ovulação em vez de impedi-la. Foi então reaproveitado como um medicamento para tratar e prevenir o câncer de mama. Como resultado, tornou-se um dos medicamentos hormonais para câncer de mama mais vendidos no mundo. De fato, um estudo relatado na The Lancet em 2012, no estudo Adjuvant Tamoxifen: Longer Against Shorter (ATLAS), demonstrou que 10 anos de tratamento com Tamoxifeno reduziram a mortalidade por câncer de mama em 50% dentro de 10-14 anos após o diagnóstico.

Modo de Ação do Tamoxifeno

Conforme relatado no artigo de Yahdiana Harahap, o TAM atua para inibir a atividade de transcrição do receptor de estrogênio. Isso, por sua vez, suprime o crescimento de tumores de câncer de mama. TAM é um pró-fármaco que é enzimaticamente convertido em endoxifeno (END), 4-hidroxitamoxifeno (4-HT) e N-desmetiltamoxifeno (NDT). Destes, a grande maioria é END (92%) e é relatado como tendo de 30 a 100 vezes mais eficácia do que o TAM. Foi relatado que concentrações séricas de END acima de 5,9 ng/mL reduzem o risco de recorrência em comparação com níveis abaixo disso. Normalmente, a análise de TAM é realizada medindo os níveis plasmáticos venosos. No entanto, o grupo de pesquisa identificou que as coletas de sangue venoso para amostragem de plasma causam desconforto para os participantes do estudo e também são inconvenientes devido à necessidade de preservar amostras criogenicamente para transporte e armazenamento.

Por esses motivos, o grupo de pesquisa decidiu avaliar os cartões de sangue seco (DBS) e os Dispositivos Mitra^® com Tecnologia VAMS^®. Ambas as abordagens com matrizes secas eliminam a necessidade de transporte e armazenamento a frio, requerem volumes de sangue mais baixos e permitem procedimentos de amostragem mais simples em comparação com a punção venosa. Os pesquisadores comentaram que uma desvantagem dos cartões DBS seria o fato de serem menos sensíveis e a necessidade de um tempo de extração maior em comparação com a punção venosa.

O grupo relatou que os Dispositivos VAMS^® tinham a vantagem de amostragem consistente em comparação com DBS. Outro motivo para avaliar os dois dispositivos foi que o cartão DBS e o VAMS^® são feitos de materiais diferentes, portanto, um pode ter um desempenho melhor do que o outro do ponto de vista do processo de amostra. Esperava-se que esta avaliação mostrasse uma possível maneira de conduzir o TDM de forma mais eficiente no futuro para o Tamoxifeno.

1. Métodos e Resultados do Estudo Com Tamoxifeno

As amostras de DBS foram preparadas pipetando 20 µL de sangue enriquecido (TAM, END, 4-HT e NDT) ou sangue do participante (coletado em um frasco) em papel PE226. As amostras Mitra (com pontas VAMS^® de 20 µL) foram coletadas diretamente no sangue, ignorando a etapa de pipetagem. Os microamostradores Mitra^® com pontas VAMS^® são projetados para coletar um volume preciso de sangue, portanto, não há necessidade de usar uma pipeta. As amostras de sangue seco foram então sonicadas em metanol (mais padrão interno em propanol).

Os extratos foram analisados por HPLC-MS/MS e o método foi validado com base nas diretrizes da Food and Drug Administration (2018) e da European Medicines Agency (2011) para validação de bioanálise. Os destaques são os seguintes:

• A imprecisão (intra e interensaio) para DBS foi entre 2,24 – 13,07% (15,85% para LLOQ) e 5,01-12,03, respectivamente.
• A imprecisão (intra- e inter-ensaio) para VAMS^® foi entre 0,58 – 11,8% e -12,64 a 15,35%, respectivamente.
• A precisão estimada em VAMS^® foi melhor (viés intra-ensaio 3,50-9,48% e viés inter-ensaio foi -1,02-5,79%) em comparação como cartão DBS (viés intra-ensaio -17,29 (LLOQ) a 14,00% e viés inter-ensaio -19,69 (LLOQ) para 14,49%).
• Todos os analitos permaneceram estáveis por 1 mês à temperatura ambiente (20-25° C) em ambos os dispositivos, bem como 24 horas a -20 °C e 40 °C para simular as condições de transporte.
• O grupo comentou que as recuperações do VAMS^® foram melhores do que do cartão DBS e concluiu que isso possivelmente se devia à diferença dos dois materiais e suas propriedades intermoleculares.
• Foi historicamente demonstrado que o % de hematócrito afetou % de viés, então o grupo pretende conduzir um trabalho de acompanhamento para investigar isso.

O ensaio foi testado em 30 pacientes:

• A concentração média medida no VAMS^® em comparação com o cartão DBS foi ligeiramente maior, mas a análise estatística provou que isso não é significativo.
• Dois pacientes apresentaram baixos níveis de END.
• O grupo concluiu que tanto o VAMS^® quanto o cartão DBS poderiam ser usados para examinar TAM e seus metabólitos para TDM, mas precisariam realizar pontes entre amostras venosas tradicionais (plasma/soro) e capilares, pois pode haver diferença nas concentrações devido à presença do hematócrito.

Comentários Neoteryx

Este estudo demonstra como microamostras de sangue seco podem ser usadas para pesquisa de monitoramento de drogas terapêuticas (TDM) e implantação potencial. Embora os resultados deste estudo mostrem que ambas as técnicas de microamostragem cartão DBS e VAMS^® podem ser usadas, deve-se notar que a extração total do sangue foi realizada nos recortes de cartão DBS de amostras pré-pipetadas. Isso seria mais uma limitação para quem coleta sangue sozinho ou para pessoas que coletam sangue sem treinamento sobre como usar uma pipeta. Por outro lado, a coleta de amostras com Dispositivos VAMS^® pode ser realizada por praticamente qualquer pessoa, em qualquer lugar.

Por fim, conforme destacado pelos autores, seria muito importante a realização de um estudo de ponte para garantir a equivalência entre plasma/soro úmido e sangue seco. De fato, o particionamento de sangue para plasma foi destacada e discutida em grande parte da literatura que descreve estudos que compararam a amostragem tradicional à microamostragem de sangue seco. Por exemplo, em 2021, Ugo de Grazia com outros pesquisadores, revisaram a literatura VAMS^® TDM de medicamentos anticonvulsivantes (ASMs), onde as proporções de sangue para plasma foram comparadas a partir de diferentes estudos. Eles afirmaram que, para aqueles ASMs em que a relação sangue/plasma se desvia de 1, é necessário um fator de correção para calcular uma concentração plasmática equivalente.

Para mais informações sobre como a microamostragem pode ajudar as pesquisas entre em contato com [email protected]