A fase móvel desempenha um papel fundamental na separação da amostra no HPLC, influenciando diretamente a retenção e a migração diferencial dos componentes. Portanto, é de vital importância que a preparação da fase móvel seja conduzida com precisão e consistência. Abaixo, apresentamos algumas orientações valiosas para otimizar o processo, garantindo a máxima precisão na separação e análise.

Opte por uma Fase Móvel Simples

O uso de uma fase móvel simples resultará em um método mais robusto e fácil de transferir. Esses métodos trazem benefícios para as organizações, já que a solução de problemas e o tempo de inatividade são minimizados quando métodos robustos são implementados.

Preparação da Fase Móvel no Peso

Embora seja possível basear a preparação da fase móvel em proporções volumétricas, o volume pode variar com as mudanças de temperatura, o que pode afetar a precisão e a reprodutibilidade da separação. Por esse motivo, é melhor basear a preparação da fase móvel em proporções de peso, que permanecerão consistentes mesmo quando as condições ambientais mudarem.

Misture os Componentes da Fase Móvel Separadamente

Se a preparação da fase móvel for baseada em volume, é importante medir os componentes separadamente e depois combiná-los. Caso a água seja medida primeiro e o solvente orgânico adicionado à água, a contração da mistura de solventes aumentará sua concentração. Se a água for adicionada à mistura de solvente, a contração da mistura de solventes diminuirá sua concentração.

Utilize uma Fase Móvel Pré-Misturada

A alternativa à mistura da fase móvel é utilizar uma já pré-misturada. Isso é particularmente útil na cromatografia em fase reversa, pois ajudará a evitar mudanças de temperatura durante a mistura, melhorará a eficiência da mistura e permitirá que a mistura seja desgaseificada de maneira mais eficaz

Correção da Temperatura do Solvente

Ao depender do volume, o solvente deve ser levado à temperatura ambiente para garantir um volume consistente e a reprodutibilidade da análise. Isso deve ser feito colocando o solvente em um banho de água quente ou fria, conforme necessário para ajustar adequadamente a temperatura do solvente.

Escolha o Filtro Correto

Ao filtrar a fase móvel durante a preparação, é importante escolher o tipo certo de filtro. Um filtro estilo membrana com tamanho de poro de 0,45 µm ou menor é recomendado para sistemas HPLC. Para sistemas UPLC, o tamanho do poro deve ser de 0,22 µm ou menor. Isso proporciona a remoção mais eficaz de partículas da fase móvel, evitando que o sistema fique obstruído.
Por fim, deseja-se que a preparação da fase móvel seja não apenas correta, mas também consistente. Isso garantirá a reprodutibilidade das análises e protegerá a integridade das separações realizadas.