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Iphree

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Iphree


logo_iphree.png Placas de Remoção de Fosfolipídeos

  

Remova Fosfolipídeos

Sem Desenvolvimento de Método

Um Método Rápido, Três Grandes Vantagens

marcador1.jpg Remova Proteínas de 96 amostras de uma só vez
marcador2.jpg Elimine Fosfolipídeos que causam a supressão de íons e
aumente a vida útil de sua coluna!
marcador3.jpg Sem Desenvolvimento de Método; um método para
substâncias ácidas, básicas e neutras

Remova Proteínas

Elimine Fosfolipídeos
   
A Solvent Shielding Technology™ evita o
gotejamento de solvente orgânico, permitindo a
precipitação de proteínas dentro dos poços da
Placa Phree para Remoção de Fosfolipídeos.
O sorbente da Phree remove de maneira
seletiva os fosfolipídeos das amostras de
plasma precipitado.
iphree1.png

Livre-se dos Fosfolipídeos e das Proteínas

  logo_iphree_vertical.png

placasderemocao.png“Demonstramos que o uso das Placas de Remoção de Fosfolipídeos Phree resultou na redução de mais de 98% na área de pico de seis fosfolipídeos que monitoramos em plasma de ratos, comparados à quebra tradicional de proteínas. Recomendamos o uso destas placas para um alto rendimento na preparação de amostras bioanalíticas para LC-MS/MS.”


                                                                  Nina Khoshaba
                                                                    WIL Research

 
   
Três Etapas Superiores à Precipitação
Tradicional de Proteínas
1. A Precipitação de Proteínas não Remove os Fosfolipídeos
Os fosfolipídeos endógenos são a fonte primária de supressão de íons e resultam em efeitos na matriz dos trabalhos bioanalíticos com LC/MS. A supressão de íons causada pela presença de fosfolipídeos pode resultar em:
resultados não reprodutíveis  
problemas de quantificação  
perda na sensibilidade do método  
variação de matriz a matriz  
     
Perfil de Fosfolipídeos Total
Precipitação de Proteínas X Placas de Remoção de Fosfolipídios Phree™
     
appid20011_appid20012.png
Limpeza do 100 μL de plasma mais 300 μL de
plasma:
Acetonitrila com Ácido fórmico 1 %
Coluna: Kinetex® 2,6 μm C18 100 Å
Dimensões: 50 x 2,1 mm
Referência: 00B-4462-AN
Fase móvel: A: Ácido fórmico a 0,1% em Água
  B: Ácido fórmico a 0,1% em Metanol
Gradiente:  Tempo (min.)  % B
   0
 60
   0,5  95
   15,5  95
   15,51  60
   19,5  60
Fluxo: 400 μL/min
Detecção: Espectômetro de massa (MS)
  a 425 ºC; 184 amu
Temperatura: 22 ºC
     
2. Reduz a Supressão de Íons
A presença de fosfolipídeos em amostras de plasma produz zonas de supressão de íons que correspondem exatamente ao perfil de eluição fosfolipídica quando analisadas através de espectrômetro de massa (MS).
     
  Plasma com Proteínas Precipitadas Plasma extraído com Phree  
appid20013_appid20013.png
     
3. Aumenta a Sensibilidade e a Vida Útil da Coluna
Os fosfolipídeos reduzem a sensibilidade do sinal de MS e encurtam a vida útil da coluna ao acumularem-se na mesma com o passar do tempo.
     
Sensibilidade da Coluna Após 250 Injeções  
injecoes20u.png
Número de injeções (20 μL de plasma). Para avaliar o efeito do acúmulo de fosfolipídeos, foram feitas injeções repetitivas de 20 μL de diclofenaco em plasma com precitipação de proteína, e de diclofenaco em plasma
extraído com Phree.
Uma Melhor Solução para a Remoção
de Fosfolipídeos
   
Remova Todas as Classes de Fosfolipídeos
As Lisofosfatidilcolinas e fosfatidilcolinas contribuem para os efeitos da matriz. Remova todas as classes de fosfolipídeos usando as Placas de Remoção de Fosfolipídios Phree™.
   
appid20015.png
Limpeza do:
 100 μL de plasma mais 300 μL de
plasma:
 Acetonitrila com Ácido fórmico 1 %
Coluna:
 Kinetex® 2,6 μm C18 100 Å
Dimensões:
 50 x 2,1 mm
Referência:
 00B-4462-AN
Fase Móvel:
 A: Ácido fórmico a 0,1 % em Água
   B: Ácido fórmico a 0,1% em Metanol
Gradiente:
Tempo (min.)
% B
  0  60
  0,5  95
  15,5  95
  15,51  60
  19,5  60
Fluxo:
  400 μL/min
Detecção:
 Espectômetro de massa (MS) a
   425 ºC; 184 amu
Temperatura:
 22 ºC
Agilent é uma marca comercial registrada da Agilent Technologies Inc. Captiva é uma marca comercial da Agilent Technologies, Inc.
Supelco e HybridSPR são marcas comerciais registradas da Sigma-Aldrich Co.
As comparações das separações podem não ser representativas para todas as aplicações.
   
Capacidade Fosfolipídica Extendida  
O sorbente da Phree possui uma maior capacidade para fosfolipídeos, permitindo se carregar até 400 μL de plasma sem uma quebra significativa de fosfolipídeos.
   
appid20046.png
Limpeza do:   400 μL de plasma mais 1,2 mL de
plasma:   Acetonitrila com Ácido fórmico a 1%
Coluna:   Kinetex® 2,6 μm C18 100 Å
Dimensões:   50 x 2,1 mm
Referência:   00B-4462-AN
Fase Móvel:   A: Ácido fórmico a 0,1% em Água
    B: Ácido fórmico a 0,1% em Metanol
Gradiente: Tempo (min.) % B
   0 60
   0,5  95
   15,5  95
   15,51  60
   19,5  60
Fluxo:   400 μL/min
Detecção:   Espectrômetro de massa (MS) a
    425 ºC; 184 amu
Temperatura:   22 ºC
Peril fosfolipídico monitorado usando m/z 184-184  
A Waters Corporation declara que o verdadeiro volume de plasma máximo recomendado que pode ser processado usando uma placa Ostro é de 350 μL, devido às limitações de volume do poço. Ostro é uma marca comercial da Waters Corporation. As comparações das separações podem não ser representativas para todas as aplicações.
Pule a fase do Desenvolvimento de Método
   
Um Método para Substâncias Ácidas, Básicas e Neutras
acn_meoh.png 1. Dispense
O solvente orgânico nos poços da Placa de Remoção de Fosfolipídeos Phree™ em um volume de 3~4 vezes o volume da amostra de plasma pretendida. O volume máximo de solvente orgânico não deve exceder 1,2 ml. Os solventes orgânicos recomendados estão listados abaixo.
 
2. Adicione
De 25 μL a 400 μL de plasma diretamente no solvente orgânico em cada poço da Placa de Remoção de Fosfolipídeos Phree. Mantenha uma razão final de 3:1 até 4:1 de solvente orgânico: plasma.
 
3. Agite*
Dois minutos na maior velocidade possível, tomando cuidado para não permitir contaminação cruzada. A amostra pode ficar por até 25 minutos.
 
4. Filtre
Centrifugue: Coloque a Placa de Remoção de Fosfolipídeos Phree no topo de uma placa de coleta e centrifugue a 500 giros por 5 minutos ou até que a filtração seja coletada.
Vácuo: Coloque a Placa de Remoção de Fosfolipídeos Phree em um manifold adequado para amostras com 96 poços ou um robô. Certifique-se de que a placa de coleta de 96 poços esteja posicionada dentro do manifold ou debaixo da Placa de Remoção de Fosfolipídeos Phree.
Aspire a 2~7 polegadas de Hg (ou 5~17 cm Hg) por até 5 minutos ou até que a filtração seja coletada.
Pressão positiva: Coloque a Placa de Remoção de Fosfolipídeos Phree em cima de uma placa de coleta e aplique 2~5 psi (0,14 ~ 0,34 bar) usando um manifold de pressão positiva.
 
* Quando usados com um instrumento de manipulação de líquidos, os ciclos de aspiração e distribuição podem ser usados para promover uma mistura e precipitação na ponteira (tip). Isso irá garantir a precipitação e filtração completa. A aplicação de vórtex não é necessária ao se realizar a mistura na ponteira (tip).
 
 
   
Solventes Orgânicos Recomendados
Solvente Volume do Solvente Volume do Plasma
Acetonitrila com Ácido fórmico 1 % 300 μL 100 μL
Metanol com Ácido fórmico a 1 % 400 μL 100 μL
Dica
 
As placas de coleta da Phenomenex e as mantas de vedação combinam perfeitamente com as Placas de Remoção de Fosfolipídeos Phree.
 
Alta Recuperação de Analítos Alvo
O protocolo geral da Phree foi desenvolvido para produzir altas recuperações de substâncias ácidas, básicas e neutras, enquanto remove todas as classes de fosfolipídeos.
 
Recuperação Absoluta de Substâncias Ácidas, Básicas e Neutras
recupecao_absoluta.png
Analíto, os dados de recuperação foram obtidos calculando-se a recuperação média absoluta de analítos extraídos de três placas Phree.
amostra.png
 
 

 

 

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