Quão Estáveis são os Analitos no Sangue Seco?
por Allcrom
Um dos grandes benefícios da microamostragem de sangue seco é o fato de que essas amostras podem ser coletadas remotamente em quase qualquer lugar, a qualquer momento e por quase qualquer pessoa. No entanto, uma das preocupações enfrentadas na microamostragem remota é garantir que a integridade molecular da amostra permaneça intacta durante o processo de envio.
O desafio de transportar amostras de sangue
Ao considerar amostras de sangue líquido (tradicional), a estabilidade do composto e da matriz pode ser comprometida pelas condições de transporte — especificamente em temperaturas elevadas (isso a depender do Analito).
Como resultado, muitas amostras tradicionais de sangue são transportadas sob condições especiais de temperatura, controlada usando gelo seco ou refrigeração. No entanto, o transporte de cadeia fria é caro e pode ser problemático quando há atrasos na logística, arriscando um evento de descongelamento que pode levar à potencial degradação da amostra.
As amostras de sangue seco permanecem estáveis durante o transporte?
Esta matéria blog explora métodos para detectar a degradação do Analito e as boas práticas de laboratório para avaliar a integridade da amostra durante os experimentos de “jornada da amostra”. Também fornece exemplos na literatura mostrando resultados de tais experimentos.
Degradação ou Eficiência de Extração?
A degradação da amostra pode ser suspeita quando há redução progressiva nas áreas de pico do Analito ao longo do tempo. No entanto, também devemos considerar outra razão comum para esse fenômeno, que pode se assemelhar à instabilidade: viés de extração temporal.
Para muitos Analitos, quanto mais velho o sangue se torna, menor a recuperação da extração. O mecanismo por trás disso não é totalmente compreendido, mas certamente há muitas mudanças que ocorrem nas primeiras 24 horas do processo de secagem da amostra de sangue. A maioria das alterações ocorre durante esse período, mas às vezes pode continuar nos primeiros 7 dias ou mais.
Este fenômeno foi demonstrado em um artigo por uma organização farmacêutica em 2018, demonstrando que para uma pequena molécula de medicamento, houve uma recuperação de extração incompleta de um dispositivo de microamostragem Mitra® (40-52%), para um método de extração direta. Como resultado, o grupo observou uma precisão significativa do método perdido ao longo de 7 dias.
No entanto, ao mudar para um método de Extração Líquido-Líquido (LLE) para o mesmo Analito, eles viram uma grande melhoria na eficiência da Extração (~90%). O método permaneceu preciso por pelo menos 35 dias em temperatura ambiente (e -20°C). Além disso, o ensaio também permaneceu preciso a 40°C por 14 dias. Os pesquisadores demonstraram uma relação entre a recuperação da Extração e a Precisão, que chamamos de “Viés de Extração Temporal”.
Vários anos atrás, a equipe de pesquisa e desenvolvimento de microamostragem da Neoteryx viu um fenômeno semelhante ao otimizar um ensaio de Figura 1. Recuperação de Corticosteroides sob duas condições de extração diferentes (o Método B tem um tempo de vórtice mais longo).
Figura 1. Recuperação de Corticosteroides sob duas condições de extração diferentes (o Método B tem um tempo de vórtice mais longo).
Degradação ou Eficiência de Extração?
Problemas com perda de amostra também podem ser uma preocupação com diferentes matrizes. Por exemplo, ao medir o Peptídeo C, marcador de diabetes, pesquisadores da Universidade de Swansea, no País de Gales (Reino Unido) relataram boa estabilidade para o Analito em papel-filtro. Ao avaliar o Peptídeo C em amostras de sangue líquido em seu laboratório, o grupo experimentou uma queda de 11% após 24 horas de armazenamento da amostra em temperatura ambiente. Em contraste, o grupo experimentou apenas uma queda de 0,1% após o armazenamento de amostras coletadas em Dispositivos Mitra® com Tecnologia VAMS® pelo mesmo período de tempo.
Por outro lado, um cenário oposto foi visto por pesquisadores da Universidade de Ghent ao medir a HbA1c em amostras de sangue seco. Eles descobriram que a HbA1c falhou nos requisitos de adequação em papel-filtro e Dispositivos Mitra® ao longo de alguns dias. No entanto, neste caso, a estabilidade de HbA1c em papel-filtro foi melhor do que nos Dispositivos Mitra®.
Outro exemplo de estabilidade da amostra é encontrado em pesquisa publicada na Austrália em 2016 sobre o antibiótico Vancomicina. Neste estudo, o grupo de pesquisa comparou manchas de Plasma em papel-filtro e em Dispositivos Mitra®. Ao medir em 0,5 a 56 horas, as amostras em papel-filtro diminuíram de 59-32% (8 µg/µL) e 60-41% (80 µg/µL). As amostras Mitra® correspondentes diminuíram de 101-87% na concentração mais baixa e apenas 102-97% a 80 80 µg/µL.
A partir desses três exemplos, diferentes estabilidades podem ser vistas nas composições químicas de diferentes tipos de microamostragem. Esta é uma das razões pelas quais a Trajan Scientific and Medical oferece soluções de microamostragem que incluem substratos de papel-filtro para microamostragem de volume preciso (usando o dispositivo hemaPEN ®) e material Polimérico para microamostragem volumétrica absorvente (usando o dispositivo Mitra ®).
Estabilidade da Amostra e a Jornada da Amostra
É importante estabelecer que a perda de amostra é resultado de degradação e não um viés mediado por extratibilidade temporal. Se for o último, isso geralmente pode ser resolvido otimizando a metodologia de Extração. É importante obter um entendimento sobre em quais condições a amostra é estável e por quanto tempo. Uma maneira é obter temperaturas e condições de teste às quais a amostra pode ser exposta ao ser enviada por serviço de postagem padrão.
Ao validar métodos, alguns grupos compararão amostras remotas enviadas para o laboratório de casa com amostras que foram coletadas no local. Por exemplo, em 2019, pesquisadores do Instituto de Ciências Clínicas e Translacionais do Centro Médico da Universidade de Rochester, em Nova York, demonstraram uma alta correlação (R2 = 0,9496) entre amostras Mitra® que foram coletadas em casa pelos participantes do estudo e enviadas de volta ao laboratório e amostras coletadas no local pelo pessoal responsável do estudo.
As amostras de sangue foram coletadas para uma aplicação de Sorologia Multiplex para influenza. É notável que as amostras remotas coletadas com o Dispositivo Mitra® tenham mostrado boa estabilidade, embora tenham sido enviadas durante o auge do verão em agosto, quando teriam sido expostas a temperaturas elevadas.
Em outro exemplo, pesquisadores do Hospital Universitário de Oslo, na Noruega, conduziram um experimento semelhante para medir o Tacrolimo remotamente. Neste exemplo, as amostras coletadas remotamente que foram enviadas para o laboratório mostraram boa estabilidade.
Conclusão: Estabilidade da Amostra de Sangue
Até o momento, existem mais de 370 publicações revisadas por pares, que mostram validações e aplicações bem-sucedidas. Uma boa proporção desses artigos mostra excelentes dados de estabilidade para uma ampla variedade de Analitos e painéis suficientes para o uso pretendido do ensaio.
Ao iniciar seu trabalho de validação, é altamente recomendável que você revise a literatura de microamostragem em seu campo de interesse. Tal revisão lhe dará uma ideia do que esperar com a classe de Analito(s) que você está investigando e nossos especialistas em microamostragem podem te auxiliar nesse processo. Você também pode ler nossa página de Novidades, onde resumimos regularmente artigos de pesquisa de microamostragem, incluindo alguns que discutem a estabilidade do Analito.
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