Triagem Neonatal: Estudo das Variações Observadas em cartões DBS

A Importância da Triagem Neonatal

Os programas de triagem neonatal são vitais para ajudar a identificar distúrbios metabólicos no nascimento, para que as intervenções de tratamento possam ser iniciadas precocemente para prevenir a progressão de uma doença ou controlar os sintomas. Atualmente, existe uma ampla gama de condições genéticas e metabólicas que são analisadas no nascimento, incluindo hipotireoidismo congênito, fenilcetonúria, fibrose cística, deficiência de acil-CoA desidrogenase de cadeia média (MCADD) e doença da urina em xarope de bordo (MSUD). Desde o início da década de 1960, a triagem neonatal precoce envolveu a coleta de sangue capilar, geralmente de uma punção no calcanhar, em papel-filtro (cartão DBS) onde o sangue é seco e enviado a um laboratório para testes. Os testes variam de acordo com a condição a ser rastreada, mas geralmente medem o acúmulo de um metabólito como a fenilalanina, conforme observado em pacientes com fenilcetonúria. A técnica de coleta de amostras de recém-nascidos em papel-filtro erradicou o uso da técnica de punção venosa mais invasiva e complicada para coletar sangue.

Viéses observados em Amostras de Sangue Seco em Papel-Filtro

Os cartões DBS resistiram ao teste do tempo na indústria de microamostragem, mas existem várias desvantagens fundamentais dessa tecnologia que dificultam a obtenção de alta precisão em dados analíticos. A principal razão é a forma como os cartões DBS são processados em laboratório. Para tentar obter uma amostra volumetricamente precisa, os cartões DBS são “perfurados” para obter recortes de diâmetro fixo. Na triagem neonatal, por exemplo, os recortes de 3,2 mm são populares, o que produz cerca de 3 µL de sangue a 45% de hematócrito (HT). No entanto, o HT pode variar em recém-nascidos (de ~30 a 65%) e isso pode ter um efeito deletério nos resultados. Isso ocorre porque o volume real de sangue coletado da perfuração pode ser muito enganoso devido aos seguintes vieses analíticos:

• Viés de distribuição do sangue – Quanto maior a porcentagem de HT, mais viscosa é a amostra, o que leva a diâmetros de sangue seco menores para o mesmo volume aplicado. Quanto mais “enriquecido” for o volume dentro do recorte, mais frequentemente isso leva a vieses positivos.

• Viés de localização da perfuração – Aqui é onde valores diferentes são vistos para alguns analitos, dependendo de onde o recorte foi realizado.

• Viés de extração – Descreve como o percentual HT afeta a eficiência da extração. Sem a otimização do método, os vieses negativos são frequentemente observados em níveis de percentuais HT mais altos. Isso também pode ser observado com amostras coletadas volumetricamente.

• Viés de matriz – Quanto maior o nível de HT, maior a chance de efeitos de matriz.

Outro viés que pode ser observado, mesmo se uma porcentagem fixa de HT for aplicada, é o viés da área da mancha de sangue. Isso ocorre porque é difícil medir o volume de sangue coletado do dedo ou calcanhar diretamente de um cartão DBS, de modo que o diâmetro real da mancha de sangue pode variar na concentração dos analitos, o que por sua vez, pode influenciar os resultados.

Para testar até que ponto os vieses são observados na triagem neonatal, SK Hall e os coautores do artigo, investigaram os seguintes vieses: viés de dispersão da mancha de sangue, viés de localização de perfuração e viés de área da mancha de sangue.

Discussão e conclusões dos autores do estudo

• A localização da punção pode afetar significativamente a concentração medida do analito, o que está de acordo com estudos anteriores publicados. Como vários desses analitos têm frações maiores no plasma em comparação com o fluido intracelular, isso se alinha com os dados encontrados nas bordas onde a transmissibilidade é maior.

• A análise do diâmetro da mancha mostrou uma diminuição nos níveis de analito com a diminuição do tamanho da mancha, sugerindo que quanto menor o volume de sangue adicionado ao cartão-filtro, mais o sangue se espalha.

• O aumento observado nas concentrações de leucina, metionina, fenilalanina e tirosina com aumento do hematócrito pode ser devido ao viés de distribuição do HT ou alterações no volume plasmático.

• Pode ser mais difícil explicar por que alguns analitos diminuíram em concentração com o aumento do HT, mas pode ser devido à forma como o sangue migrou na matriz do cartão.

• Os resultados do tamanho da mancha, localização da perfuração e HT diferentes podem levar a dados falsos positivos e falsos negativos. Isso ocorre apesar do fato de que as instruções são dadas às enfermeiras e parteiras neonatais para aplicar volumes de sangue apropriados da punção de calcanhar aos cartões DBS. Até certo ponto, os laboratórios podem fazer o controle de qualidade das manchas e controlar os locais de perfuração para ajudar a mitigar essas preocupações.

• Os autores propuseram que o Cardscan^™ poderia ser usado como um marcador substituto para a localização do punção e níveis de HT.

Comentários da Neoteryx

O impacto que o cartão DBS teve na detecção precoce de doenças genéticas e erros do Metabolismo em recém-nascidos não pode ser subestimado. No entanto, as questões fundamentais associadas à tentativa de realizar análises quantitativas a partir cartões DBS, especialmente em uma coorte onde o HT pode variar muito, exigiram algumas melhorias no campo da microamostragem de sangue.

A necessidade de superar as limitações dos cartões DBS criou uma oportunidade na indústria de microamostragem para novos dispositivos de coleta de amostras que ofereçam uma abordagem volumétrica mais precisa para amostragem de sangue. De fato, a natureza volumétrica das ferramentas de coleta de amostras mais recentes, como os Dispositivos Mitra^® baseados na tecnologia VAMS^®, tem o potencial de superar muitos dos problemas (tamanho da mancha de sangue, localização da perfuração e tendências de distribuição do HT) observados no trabalho citado aqui.

Os dispositivos de microamostragem de volume fixo podem oferecer uma solução para os ensaios de triagem de recém-nascidos atuais e de última geração.

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